Mal das folhas ii

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ISSN 1516-4349

Métodos para Indução e Análise de Enzimas
Micolíticas Secretadas por Dicyma pulvinata

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O mal-das-folhas é uma das mais destrutivas doenças da seringueira (Hevea sp.) gerando
perdas de até 100 % na produção (Gasparotto et al., 1990). O patógeno, Microcyclus ulei,
se dissemina principalmente sob a forma de conídios, que em condições favoráveis de
temperatura e umidade,germinam, penetram no limbo foliar e, ao colonizarem os tecidos,
provocam lesões necróticas, redução do processo fotossintético e até mesmo a morte das
plantas. Os ataques sucessivos da doença debilitam as plantas, tornando-as altamente
vulneráveis ao ataque de fitopatógenos secundários (Gasparotto et al., 1984).
O controle biológico é altamente desejável, mesmo quando associado a outrosmétodos, por
promover menor impacto ambiental e desequilíbrio ecológico (Bettiol, 1991).
Os mecanismos básicos pelos quais os microrganismos agentes de biocontrole podem atuar
são por meio de interações antagonísticas, tais como, antibiose, competição e
micoparasitismo (Melo & Azevedo, 1998).

Brasília, DF
Novembro, 2002

Autores
Paulo Roberto Queiroz
Biólogo, M.Sc., bolsista,
EmbrapaRecursos Genéticos e
Biotecnologia.

Wendel Neiva Martins Lago
Estagiário graduando, Embrapa
Recursos Genéticos e
Biotecnologia.

Raquel Adjafre da Costa
Matos
Estagiária graduanda, Embrapa

Dentre as medidas de controle mais promissoras para o mal-das-folhas destaca-se o
biocontrole, usando o fungo Dicyma pulvinata (Berck & Curtis) Arx (syn. Hansfordia
pulvinata). Vários estudos têmdemonstrado o elevado potencial de controle deste
micoparasita sob condições de campo. Colonizando as lesões, D. pulvinata impede a
esporulação do patógeno, por mecanismos ainda desconhecidos, reduzindo o desfolhamento
das plantas e a taxa de inóculo para evitar novas infecções. Entretanto, o potencial de uso
deste agente de biocontrole esbarra em sua baixa taxa de crescimento em substratosartificiais e no desconhecimento da natureza de suas enzimas micolíticas, compondo fatores
a serem superados para o uso de D. pulvinata em escala comercial.
Existe na literatura (Chet, 1987, 1992; Chet,. & Inbar, 1994; De La Cruz et al., 1992,
1995; Lima et al., 1997, 1999, 2000; De Marco et al., 2000), informações sobre o
desempenho fundamental das enzimas micolíticas na hidrólise da parede defungos
fitopatogênicos. Sendo assim, pode existir uma correlação entre o potencial antagônico e a
secreção enzimática pelo parasita, refletindo na eficiência de biocontrole. A avaliação da
produção de enzimas micolíticas produzidas por linhagens de D. pulvinata é de caráter
importante no entendimento do mecanismo molecular, responsável pela ação antagônica
deste micoparasita sobre o fitopatógenoM. ulei. A proposta para estudos bioquímicos mais
detalhados foi o principal objetivo deste trabalho, fornecendo dados para a seleção de
linhagens com potencial para o biocontrole de Microcyclus e estabelecendo uma
metodologia para indução e identificação de enzimas hidrolíticas, relacionadas ao parasitismo
de D. pulvinata.

Recursos Genéticos e
Biotecnologia.

Luzia Helena Corrêa LimaBióloga, PhD, Bioquímica,
Pesquisador Embrapa Recursos
Genéticos e Biotecnologia.

Sueli Corrêa Marques de
Mello
Eng. Agra., PhD, Fitopatologia,
Pesquisador Embrapa Recursos
Genéticos e Biotecnologia.

Sendo assim, conídios da linhagem CG 772 de D. pulvinata foram semeados em 25 mL de
meio YG (glicose 25 g L-1, extrato de levedura 5 g L-1 e ágar 20 g L-1 pH 5,5), MYG (extrato
de malte5 g L-1; extrato de levedura 2,5 g L-1; glicose 25 g L -1 e ágar 20 g L-1 pH 5,5) e
MYPG (maltose 3 g L-1; extrato de levedura 3 g L -1; peptona 5 g L-1; glicose 20 g L-1 e ágar
20 g L-1 pH 5,5) e mantidos a 28º C por 15 dias. Após a esporulação, as placas foram
lavadas com 5 mL de 0,01% de tween 80 e os conídios, diluídos e contados em
hemocitômetro.
Para o crescimento em meio líquido,...
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