LEIS DA ESPECTROMETRIA

LEIS DA ESPECTROFOTOMETRIA
ESPECTRO DE LUZ
1. A luz, dependendo de seu comprimento de onda, pode ser invisível ou visível aos nossos olhos.
ESPECTROFOTOMETRIA
1. É uma medida da quantidade de energia absorvida por uma solução;
2. Como o objetivo da análise bioquímica é a pesquisa da concentração de uma substância, em um determinada solução e,
3. Essa concentração é proporcional à quantidade de energia absorvida...
4. Isso obriga os analistas a conhecerem:
OS EQUIPAMENTOS
1. Os aparelhos que medem essa quantidade de energia absorvida e que têm aplicação no laboratório de Bioquímica Clínica são:
1. FOTOCOLORÍMETRO
2. ESPECTROFOTÔMERO
FOTOCOLORÍMETRO
1. CONSTITUÍDO POR:
1. Lâmpada ‘tungstênio’ – emite luz em diversos comprimentos de onda
2. Monocromador – ‘filtro’ - serve para isolar uma região do espectro de luz
3. Cubeta – ‘onde é colocada a amosta’
4. Detector – Detecta a luz absorvida
5. Medidor – serve para medir a quantidade de luz absorvida pela amostra
FILTROS
FILTROS
1. Os FOTOCOLORÍMETROS selecionam uma faixa do espectro, logo são menos sensíveis;
2. Os ESPECTROFOTÔMETROS selecionam um comprimento de onda específico, logo são mais sensíveis;
ESPECTROFOTÔMETRO
1. CONSTITUÍDO POR:
1. Lâmpada ‘Deutério’ – emite luz em diversos comprimentos de onda
2. Monocromador – ‘Prisma ou Grade de difração’ - serve para isolar um comprimento de onda desejado doespectro de luz;
3. Cubeta – ‘onde é colocada a amosta’
4. Detector – Detecta a luz absorvida
5. Medidor – serve para medir a quantidade de luz absorvida pela amostra;
MEDIDA DA ABSORBÂNCIA
LEI DE LAMBERT - BEER
1. “Há uma correlação direta entre a ABSORÂNCIA (A) e a concentração de determinada substância, num dado comprimento de onda, desde que o caminho óptico e a espessura da solução sejam constantes”
2. Entretanto, torna-se necessária uma operação destinada a eliminar a luz REFLETIDA, a TURBIDEZ da amostra e outras interferências.
OPERAÇÃO DE ZERAGEM
1. Com o BRANCO no