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Matéria: Microbiologia I Professoras: Lívia e Janaína Alunas: Juliana Esteves

Patrícia Sbano Renata Gudergues Ryanna Soares Thalita Martins

Introdução

As bactérias podem ser divididas em dois grandes grupos, as Gram-Positivas e as Gram-Negativas. Assim, podem ser diferenciadas:

Gram Positivas Gram Negativas

Ala-Glu-Lya-Ala Ala-Glu-DAP-Ala

Tetrapeptídeos não se ligam diretamente

Ligaçãodeireta entre tetrapeptídeos

Presença de mais camadas de peptídeosglicanos (cerca de 20)

Presença de menos peptídiosglicanos (cerca de 5)

Presença de ácidos tecóicos que participam da passagem de íons

Ausência de ácidos tecóicos

Não apresenta membrana externa

Presença de membrana externa flexível, sendo uma segunda bicamada fosfolipídica Ausência de periplasma Presença de periplasma

Um modode diferenciar as bactérias gram positivas das gram negativas é pelo método denominado coloraçãop de gram. Esse método requer a utilização de corantes específicos, tais como lugol, safranina e cristal violeta. O lugol permite a formação de complexos CVI (Cristal Violeta Iodo) insolúveis em água, assim, o esfregaço com as bactérias apresentam, com o uso do cristal violeta, a coloração roxa. Depoisoutros passos são seguidos para a determinação, o que veremos adiante.

Outra estrutura facultativa é o esporo, presente, na maioria das vezes, em gram positivas. Permitem resistência para as bactérias, contra condições adversas, como raios UV, escassez de nutrientes, calor ou frio excessivo, desinfectantes e à desidratação. Quando as bactérias que apresentam esporos se encontram em condiçõesadversas, ocorre o processo de esporulação, proporcionando a manutenção do material genético de forma a parar o metabolismo. O esporo é constituído de exosporo, capa e córtex. Mas quando em condições favoráveis o esporo dá origem à célula vegetativa. Há uma prática, na qual podemos visualizar os esporos a partir de coloração. Desse modo, podemos classificár a bactéria de acordo com a localização doesporo na célula, como; centrais, terminais e subterminais.

Objetivos:

Melhor visualização da matéria administrada em sala de aula sobre os dois grande grupos de bactérias existentes. Observar os resultados e discutir, com base no conteúdo, a coloração apresentada. Observar e classificar uma bactéria por meio de seus esporos, sempre concomitante com o conteúdo abordado em sala.

MateriaisUtilizados:

1) Coloração de Gram

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Bico de bunsen Lâminas

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Tubo com Staphylococcus aureus

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Salina Alça Bacteriológica Cristal violeta

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Lugol Álcool absoluto Safranina Óleo de imersão Microscópio Pinça de Madeira

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2) Coloração de Esporos

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Bico de bunsen Lâminas Tubo com Staphylococcus aureus SalinaAlça Bacteriológica Bácher Verde Malaquita Safranina Óleo de imersão Microscópio Pinça de Madeira Placa de Amianto

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Metodologia:

1) Coloração de Gram

Em uma lâmina limpa, dentro da zona de segurança do bico de Bulsen, adicionam-se uma gota de salina. Com a alça bacteriológica devidamente flambada ao rubro, coleta-se o inóculo do meio de cultura e espalha-se omesmo na lâmina junto à salina com o auxílio da alça, seguindo as recomendações de biossegurança necessárias . O espalhamento da amostra deve ser feito de modo que todo o conteúdo do inóculo esteja uniforme na lâmina a ser analisada.

Para a fixação da bactéria à lâmina, paira-se a mesma contendo o inóculo sob o bico de

Bulsen até que o líquido contido (bactéria + solução salina) seque, de modo amatar as bactérias existentes no mesmo.

Com o esfregaço preparado, adiciona-se cristal violeta, corante principal, de modo a cobrir todo o esfregaço durante um minuto. Lava-se o esfregaço com água destilada para a retirada do excesso de cristal violeta da amostra. O suficiente se apresenta quando não mais é observada a coloração roxa na água.

Posteriormente, adiciona-se lugol, que possui a...
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