Lab de biologia molecular

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LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR - NAT ANA MARGARIDA BARREIRA NASCIMENTO

1. INTRODUçãO

Nos finais dos anos 90 a Técnica Amplificação de Ácido Nucléico¹ (NAT) tornou-se comum nos laboratórios de biologia molecular, constituindo-se então em um passo essencial para a segurança transfusional. A Portaria nº262/2002 do Ministério da Saúde, de 05 de fevereiro de 2002, tornou obrigatório ainclusão dos testes de amplificação e detecção de ácidos nucléicos NAT, em todas as amostras de sangue de doador. Com a implantação do NAT diminui-se o “risco de transmissão dos vírus da Hepatite C HCV² e do Vírus da Imunodeficiência Humana HIV³, por transfusões de hemocomponetes, aumentando a segurança transfusional” (Ministério da Saúde, 2002). A partir daquela data, os testes são obrigatórios, noâmbito da Hemorrede Nacional, em todos os serviços de hemoterapia públicos, filantrópicos e/ou privados contratados pelo SUS, e privados. Alguns hemocentros, a exemplo do da Bahia, não possuem estrutura física adequada para implantação da técnica. O Hemoba estima a realização de 1.000 testes por dia4, que deverão ser realizados em um laboratório especialmente construído para tal finalidade. O que essetrabalho pretende é “clarear idéias”, estabelecer critérios para a elaboração do projeto do laboratório. É o esboço de um estudo a ser aprofundado.
NAT Nucleic Acid Amplification Test HCV é um vírus que infecta o fígado e resulta na doença de fígado, na falha do fígado e na morte. Mais comum e mais infeccioso do que HIV-1, o vírus HCV afeta cerca de 170 milhões de pessoas no mundo. O HCV étransmitido de individuo a indivíduo através dos líquidos de corpo, particularmente do sangue e dos produtos do sangue. 3 O HIV é o retrovirus que causa a Sindrome da Imunodeficiencia Adquirida (SIDA/AIDS). A AIDS foi identificada pela primeira vez no Brasil em 1982. E desde o início da epidemia, a faixa etária mais atingida tem sido a de adultos entre 20 a 39 anos de idade. O último BoletimEpidemiológico da Aids, publicação trimestral do Ministério da Saúde, já registrou 179.541 casos de Aids desde 1980. Deste total, 4.077 são entre adolescentes na faixa etária dos 13 aos 19 anos.
1 2 4 Fonte: Hemoba.

2. O QUE É O NAT?

Um sangue seguro é aspiração de médicos e doentes. Durante os anos 80 e 90 se conseguiu uma segurança , então considerada máxima, para os vírus HBV (Hepatite B), HCV(Hepatite C) e HIV (Imunodeficiência Humana Adquirida), eliminando os doadores de sangue com anticorpos contra qualquer desses vírus. No entanto, o período de soroconversão de 22 dias para o HIV e de 50 a 60 dias para o HCV, em que há viremia sem anticorpos, conhecida como “fase da janela imunológica”, constituiu um obstáculo importante para se poder considerar uma transfusão como isenta de riscos,embora as probabilidades de transmissão nesse período sejam raras (PINHO et all, 2000). Nos últimos anos, tornou-se cada vez mais usual as técnicas de biologia molecular com amplificação do material genético. Na década de 90, estas técnicas começaram a ser

utilizadas na rotina para diagnóstico e acompanhamento de doentes com Hepatite por vírus B e C e, posteriormente, para HIV. Iniciou-se aprática de várias técnicas de amplificação dos ácidos nucléicos (NAT): reação em cadeia da polimeraze (PCR), amplificação baseada na seqüência de ácidos nucléicos (NASBA), DNA ramificado (bDNA). As NAT foram desenvolvidas, na área de rastreio das doações de sangue, para detecção da infecção no período que precede o desenvolvimento de anticorpos, durante a fase inicial da mesma. Devido ao elevado númerode amostras que têm de ser processadas num curto período de tempo, estas provas deverão ser realizadas em “pool”. É o limiar de sensibilidade das provas e o tamanho do “pool” 5 das amostras que irá influenciar a eficácia destas técnicas. Para a utilização de tais práticas, é necessário admitir e formar pessoal qualificado, criar espaços e estruturas adequados, ter os equipamentos necessários...
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