ITEM2c

MEDIDA DO
CRESCIMENTO
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR
OS MICRORGANISMOS

Etapa fundamental: diluição (para fungos filamentosos se aplica a esporos)
Fator de diluição = volume da amostra/volume total
1 mL em 9 mL ==> diluição 1:10 ou 1/10 ou 10-1
Diluição seriada: consiste em diluir sucessivamente a diluição inicial.
Esquema:
1) Contagem do nº total de células (vivas e mortas)
- câmara de contagem (matar ou impedir movimento)
- coulter-counter (alteração de resistência)
- contagem em esfregaços corados (0,01 mL)
- turbidimetria (comparação visual com solução de sulfato de bário – escala de Mc Farland

2) Contagem do número de microrganismos vivos
Baseado no conceito de que a viabilidade é o poder de formar colônias macroscópicas em meio de cultura sólido ou de tornar turvo um meio de cultura líquido ==> item fundamental: meio de cultura.
- contagem do nº de colônias na superfície do meio (entre
30 e 300 colônias)
- contagem do nº de colônias “pour plate” (entre 30 e 300 colônias) - contagem do nº de colônias após inoculação com gotas
(até 15 colônias) (esquema)
- contagem do número de colônias após filtração
- método do Número Mais Provável (N.M.P) (turvação meio líquido) (tabela)

- método do Número Mais Provável Alternativo
(N.M.P.A.) (colônias visíveis em meio sólido) (tabelas)
3) Medida da biomassa (vivos e mortos)
- determinação da massa celular secagem do filtro contendo células secagem da suspensão de células multiplicar pela diluição, se houver.
-turbidimetria com espectrofotômetro
Obtenção de curva padrão de células (massa seca)
- Dosagem de componentes celulares (nitrogênio e proteínas, ergosterol, glicosamina)
- Dosagem de compostos resultantes da atividade metabólica (CO2, O2, ácidos, etc.)
-Medida de volume de material celular após centrifugação.

EXERCÍCIOS
1) Uma amostra de uma suspensão de esporos diluída (1:4) foi colocada em câmara de Neubauer de 400 quadrados (1/400 mm 2 e
0,1 mm), e procedeu-se à contagem de cinco campos de 16 quadrados. Os