Introdu O A Espectrofotometria E Suas Aplica Es

Universidade Federal de Alfenas. UNIFAL – MG
Campus Alfenas

Aula Prática abordando a quantificação de proteínas por espectrofotometria.

Hudily Santos
Laura Mascarenhas
Thamara Castro

Introdução à Espectrofotometria e suas aplicações

A espectrofotometria estuda a medição das grandezas relativas à emissão, à recepção e à absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho. As medições são analisadas baseadas na absorção da luz por moléculas dispersas em uma solução.
A técnica é bastante utilizada na área da higiene, medicina, bioquímica, engenharia de combustíveis, monitoramento do meio ambiente e controle de qualidade de amostras. Especificamente na bioquímica, ela ajuda a compreender as disfunções metabólicas desencadeadas por alguma anomalia.

Descrição do método

O aparelho usado é o espectrofotômetro que permite a passagem de uma luz monocromática através de uma solução e mede a quantidade de luz absorvida por ela. Com o uso de um prisma é possível, através do aparelho, segregar a luz em feixes de diferentes comprimentos de onda. O que influencia a absorção de cada comprimento de onda é a natureza e a concentração da substancia, além de sua espessura que é atravessada pela luz.
Usa-se cores e concentrações padrões para que a solução em analise possa ser comparada.

Intervalos de comprimento de onda no espectro eletromagnético

Resultados

Foram preparados 10 tubos que continham concentrações diferentes de Albumina Sérica Bovina (Bovine sérum albumin – Factor V). O primeiro tubo estava isento dessa concentração para que houvesse a comparação dos resultados. E estes estão evidenciados a seguir:

X
Y
Concentração (M)
Absorbância
0,00
0,000
0,20
0,012
0,40
0,019
0,80
0,039
1,20
0,051
1,60
0,072
2,00
0,098
2,40
0,112

Com a equação da curva padrão, conseguimos descobrir as concentrações das amostras 9 e 10. Para isso basta substituir seu valor de absorbância no Y da