Indução de dano ao DNA e apoptose por extrato aquoso quente de Chlorella vulgaris

Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro –
UNIRIO

Indução de dano ao DNA e apoptose por extrato aquoso à quente de Chlorella vulgaris
“Hot water extract of Chlorella vulgaris induced DNA damage and apoptosis”
Clinics (Faculdade de Medicina – USP)
Índice h5: 29 - Mediana h5: 37

Bárbara Verena Dias Galvão
Kossiwa Marcelle Esther Todjro
Rutheneia Carvalho
Hércules Rezende Freitas

INTRODUÇÃO
• Carcinoma Hepatocelular

INTRODUÇÃO
• Apoptose (morte celular programada)
• Agentes dietéticos quimiopreventivos e caspases;
• Danos no DNA e apoptose (p53 → Bax, caspase-3 e -8, Noxa, PUMA e p53AIP). INTRODUÇÃO
• Chlorella vulgaris
• Alga verde unicelular do Filo Chlorophyta;
• Rica em proteínas*;
• Propriedades antioxidantes e anticancerígenas;
• “Estudos in vivo revelaram a eficácia antitumoral significativa e antigenotóxico de C. vulgaris.” *Sem significância dietética.

OBJETIVO

• Determinar os efeitos antiproliferativos e apoptóticos de extratos aquosos à quente de Chlorella vulgaris em linhagem de células de hepatoma do tipo HepG2.

METODOLOGIA
• Cultivo e extração de Chlorella vulgaris
•

University of Malaya Algae Culture Collection (UMACC, Malaysia);

•

Bold’s basal media (BBM);

•

Ciclo de 12 horas claro-escuro.

• Centrifugação
(1000 rpm)

• Liofilização

• Água destilada
10% (m/V)

• Centrifugação
(10000 rpm por 20 min)
• Condensador de refluxo
(100 °C por 20 min)

METODOLOGIA
• Cultura celular e tratamento
• HepG2
• WRL68

Eagle’s minimal essential médium (MEM)
Após 24 h
Adição do extrato aquoso de C. vulgaris em concentrações de 0-4 mg/ml.

METODOLOGIA
• Ensaio de proliferação celular
• 2×104 células por poço;
• Tratamento com extrato aquoso aquecido de Chlorella vulgaris;
• Incubação por 24 h;
• Bromodesoxiuridina (BrdU);
• Solução de desnaturação;
• ELISA (Enzyme Linked Immuno
Sorbent Assay).

METODOLOGIA
•

Ensaio de apoptose por método fluorimétrico (TUNEL)
–

“The DeadEnd™ Fluorometric TUNEL System measures nuclear DNA fragmentation