Guirdiase

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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DA GIARDÍASE USANDO MÉTODOS COPROLÓGICOS TRADICIONAIS E MÉTODO DE ELISA

1- INTRODUÇÃO
No decorrer do século, houve um declínio nas taxas de óbito por DIPs (doenças infecto-parasitárias), embora tenha sido apenas de 10%. Entretanto, permanece na terceira posição como causa de internações hospitalares (BRASIL, 2003). Dentre as DIPs, o parasitismo intestinal constituium sério problema de saúde pública no Brasil, pois está diretamente relacionado às condições sanitárias em que a população vive. As crianças são as mais acometidas, provavelmente devido à alta suscetibilidade, decorrente da imaturidade do sistema imunológico e o comportamento ligado à fase oral. As crianças parasitadas mostram-se desnutridas, com deficiência no desenvolvimento físico,psicossomático e social. Dentre os enteroparasitos, o protozoário Giardia lamblia (Anton van Leeuwenhoek, 1681) responsável pela giardíase é considerado importante agente etiológico de diarréia, responsáveis por vários surtos no mundo, estando entre as três principais causas de morbidade em crianças de zero a cinco anos de idade e associado à morte infantil, no Brasil (Franco,1996). É transmitida ao homempela ingestão de água e alimentos contaminados com material fecal. Seu ciclo evolutivo apresenta dois estágios de vida: a forma cística e a forma trofozoítica. O cisto é a forma infectante e apresenta grande resistência às condições ambientais e aos desinfetantes químicos empregados para potabilizar a água, podendo permanecer viável por vários meses em ambientes aquático (Neto 2004). O exame defezes é o mais usado para o diagnóstico laboratorial desta parasitose. Em fezes liquefeitas, o método de diagnóstico direto é o mais comum, que permite observar a forma trofozoítica. O método hematoxilina férrica mostra as estruturas citoplasmáticas e nucleares de ambas as formas da G. lamblia, enquanto que em fezes formadas, o método de concentração de Faust et al., (1970) é o mais indicado(Zimmerman, 1995). O método imunoenzimático qualitativo para a detecção de antígeno específico para G. lamblia foi usado pela primeira vez no Brasil, em pacientes de Belo Horizonte, mostrando boa especificidade e sensibilidade (Rocha et al 1999). O objetivo deste estudo foi comparar o método de pesquisa de coproantígenos-ELISA com os usados na rotina para a pesquisa de cistos de Giardia lamblia.

2.MATERIAL E MÉTODOS

Foram coletadas fezes de 158 crianças, de zero a 12 anos, de uma creche pública do município do Rio Grande, RS. A coleta foi devidamente autorizada pelos pais ou responsáveis. As amostras de fezes das crianças foram coletadas no período de julho a setembro de 2006. De cada criança, foi coletada uma amostra de fezes, sendo acondicionada em copo de coleta estéril, devidamenteetiquetado e identificado com a data da coleta e número da amostra. Até o momento do exame o material foi conservado entre 4°C a 8ºC, no máximo por dois dias, sendo realizada pesquisa de cistos de Giardia lamblia pelo método Centrífugo-sedimentação pelo formol-éter (Ritchie) e Centrífugo-flutuação em solução de sulfato de zinco (Faust et al, 1970). Para pesquisa de coproantígenos pela técnica deELISA, imunoensaio enzimático para detecção qualitativa de antígeno cístico de Giardia lamblia em amostras fecais humanas, as amostras de fezes foram conservadas em formalina a 10%. Em cada orifício da placa, sensibilizada previamente com anticorpo monoclonal para Giardia lamblia, foi adicionada uma alíquota de amostra fecal (50 µl), e controles positivos e negativos, sendo incubada por uma horaa temperatura ambiente. Após, foram adicionados 50 µl de conjugado, com incubação de 30 minutos a temperatura ambiente. A seguir, foram adicionados 100 µl de substrato, com incubação por 10 minutos. Seguido da adição de 50 µl de solução deparada por dois minutos e leitura em leitor de ELISA no comprimento de ondas (450 nm), conforme recomendação dos fabricantes do kit Giardia II (Medivax). Os...
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