genetica molecular

BIOLOGIA MOLECULAR
AULAS PRÁTICAS

3º ano, 1º semestre

2013-14

EXERCÍCIO Nº 1

Considere que fez uma electroforese em gel de agarose, para verificar o mapa de

restrição

do

plasmídeo

pVU1,

abaixo

desenhado.

Desgraçadamente, estava distraído (a) e não registou que enzima(s) utilizou em cada uma das misturas de reacção que foram analisadas (1 a
6).
Consulte o mapa de restrição do plasmídeo e o esquema da separação electroforética realizada apresentados, e indique qual ou quais foram as enzimas utilizadas em cada um dos ensaios de restrição (1 a 6).

BamHI:

BamHI/ HindIII:

PvuI:

HindIII/ PvuI:

PvuI/ BamHI:

Bam HI/ HindIII/ PvuI:

EXERCÍCIO Nº2
As enzimas de restrição BanI, HaeII e SacI foram usadas na construção do mapa de restrição do plasmídeo pTSU. Efectuaram-se digestões simples e múltiplas, e os produtos de digestão foram analisados em gel de agarose.
Os resultados obtidos estão representados no esquema seguinte:

Construa o mapa de restrição do plasmídeo pTSU para as enzimas BanI, HaeII e SacI, indicando no esquema a posição relativa dos diferentes sítios de restrição. EXERCÍCIO Nº3
Na Figura está esquematizado um ensaio de sequenciação de um fragmento de DNA, segundo o método enzimático ou de Sanger.

DNA

5’ - TGC
3’ - ACG

CCA – 3’
GGT – 5’

(429)

(460)

primer

reacção A α-32P dATP

ENZIMA (E):___________________

reacção C α-32P reacção G

reacção T

α-32P dATP

dATP

α-32P dATP

ddATP

ddCTP

ddGTP

ddTTP

dGTP

dGTP

dGTP

dGTP

dCTP

dCTP

dCTP

dCTP

dTTP

dTTP

dTTP

dTTP

A
____

C

G

T

____
____

ntd 460

____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____
____

ntd 429

____
____
____

3.1. Identifique a enzima (E) utilizada.

3.2. Por que razão se utilizaram