Fundamentos De Fotometria

Fundamentos de Fotometria No laboratório de análises bioquímicas, a principal técnica empregada na maioria dos testes é a fotometria. Inúmeras metodologias empregam os princípios básicos da fotometria para transformar os resultados de reações bioquímicas em resultados de laboratório, expressos em unidades como mg/dL, U/L ou mmol/L nos laudos de laboratório. A fotometria é a medida da luz. A luz pode ser absorvida, emitida, refletida ou dispersa e medida por meio de equipamentos específicos. A maioria das reações bioquímicas é monitorada pela luz que produzem. A espectrometria utiliza a propriedade das soluções de absorverem luz em determinados comprimentos de onda para quantificar reações bioquímicas. Na prática, o laboratório realiza reações bioquímicas e mede luz absorvida pelos substratos consumidos ou produtos formados. A quantidade de luz absorvida, ou a cor da solução, é proporcional à concentração da substância corada em solução. Essa relação é conhecida como Lei de Beer e permite a transformação da luz medida em concentração. Essas medidas são efetuadas por instrumentos fotocolorimétricos ou espectrofotômetros. A luz é definida como uma forma de energia eletromagnética, formada por ondas que apresentam comprimentos diferentes. O comprimento da onda é medido em nm, no qual 1 nm equivale a 10-9 m. As radiações eletromagnéticas com comprimento de onda entre 380 e 750 nm são visíveis ao olho humano. A luz visível constitui uma parcela muito pequena no espectro eletromagnético (Figura 1). A zona do espectro cujas radiações possuem comprimento de onda abaixo de 380 nm é denominada ultravioleta (UV). Comprimentos de onda acima de 750 nm correspondem à zona infravermelha. A visão humana detecta somente a parte visível do espectro, enquanto filmes fotográficos e fotocélulas são sensíveis a outras porções do espectro.

Figura 1. Ilustração do espectro eletromagnético. Quando a luz branca (luz solar) passa através de um prisma (ou retículo de difração), ela se