Estudo dos efeitos da hidroxi-nimesulida em mitocôndrias isoladas de fígado de rato

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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRÃO PRETO


DISSERTAÇÃO DE MESTRADO




ESTUDO DOS EFEITOS DA HIDROXI-NIMESULIDA EM MITOCÔNDRIAS ISOLADAS DE FÍGADO DE RATO





CLAYTON DA SILVA FREITAS





Ribeirão Preto
2004

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRÃO PRETO
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA




ESTUDO DOS EFEITOS DAHIDROXI-NIMESULIDA EM MITOCONDRIAS ISOLADAS DE FÍGADO DE RATO





Dissertação de Mestrado apresentada à Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto para obtenção do grau de Mestre em Ciências, área de Bioquímica.






Aluno: Clayton da Silva Freitas

Orientador: Prof. Dr. Carlos Curti


Ribeirão Preto

2004
FICHA CATALOGRÁFICA


Preparada pelaBiblioteca Central do Campus


Administrativo de Ribeirão Preto – USP


Este trabalho foi realizado nos seguintes Departamentos:

- Departamento de Física e Química – Laboratório de Bioquímica da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto – USP

- Departamento de Análises Clínicas, Bromatológicas e Toxicológicas – Laboratório de Toxicologia da Faculdade de Ciências Farmacêuticasde Ribeirão Preto – USP.



SUMÁRIO
Lista de siglas e abreviaturas...........................................................................5
RESUMO.............................................................................................................7
INTRODUÇÃO.....................................................................................................9
Mitocôndria:função energética....................................................................9
Mitocôndrias como fonte de EROs............................................................10
Movimentação de Ca+2 nas mitocôndrias..................................................11
Transição de permabilidade mitocondrial..................................................12
Morte celular pornecrose e apoptose.......................................................13
Mitocôndria e apoptose..............................................................................14
Prevenção/Indução da apoptose e estados patológicos...........................14
Fármacos antiinflamatórios não esteroidais (AINEs).................................15Nimesulida.................................................................................................16
OBJETIVOS......................................................................................................20
MATERIAIS E MÉTODOS.................................................................................21
1. Isolamento de mitocôndrias de fígado de rato.....................................22
2.Determinação da proteína....................................................................22
3. Procedimento padrão de incubação....................................................23
4. Respiração mitocondrial.......................................................................24
5. Potencial de membrana mitocondrial...................................................25
6.Oxidação de NAD(P)H.........................................................................25
7. Inchamento mitocondrial......................................................................26
8. Formação de H2O2 pelas mitocôndrias................................................26
9. Estimativa do efluxo de Ca+2 nas mitocôndrias....................................26
10. Níveismitocondriais de grupos sulfidril de proteínas...........................27
11. Níveis mitocondriais de GSH................................................................27
RESULTADOS E DISCUSSÃO........................................................................28
CONCLUSÃO....................................................................................................47
REFERÊNCIAS...
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