Esporos

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brCentro Federal de Educação Tecnológica de Química de Nilópolis – Unidade Rio de Janeiro

Relatório de Microbiologia:
Coloração de Esporos

Rio de Janeiro, 11 de abril de 2008.
Alunas: Adriana de Menezes Lima N°: 01.
Elizana de Azevedo Silva N°: 06.
Thays Cristine dos Santos Vieira N°: 15.
Turma: QM 171.
Professoras: Carolina e Lidiane.
Disciplina: Microbiologia.

Coloração deEsporos

Introdução Teórica:

A esporulação, processo pelo qual alguns gêneros de bactérias formam esporos. Ela ocorre quando estas bactérias estão face a situações críticas para sua sobrevivência, ou seja, as condições ambientais são adversas para o crescimento bacteriano. De maneira geral, isto ocorre quando há falta de nutrientes, como carbono ou nitrogênio.
Os esporos apresentam-sesob a forma de corpúsculos esféricos ou ovóides, livres ou no interior da bactéria. Formam-se pela invaginação de uma dupla camada de membrana celular, que se fecha para envolver um cromossoma e uma pequena quantidade de citoplasma, garantindo a sobrevivência da espécie. Esta camada é responsável pela resistência à coloração e ao ataque dos agentes físicos e químicos da esterilização e desinfecção.Por isso que pra se corar os esporos é necessário um tempo prolongado de exposição ao corante (verde malaquita), associado ao aquecimento, o que permite o rompimento desta barreira obtendo-se, então, o esporo corado em verde intenso. São características comuns aos esporos: decréscimo na quantidade total de água em comparação com o estado vegetativo, refratividade, alta resistência a condiçõesambientais adversas, habilidade de germinar e produzir células vegetativas após longos períodos de estocagem.
Na fase esporulada, as bactérias não realizam atividade biossintética e reduzem sua atividade respiratória. Nesta fase também não ocorre a multiplicação e crescimento bacteriano. Esta incapacidade de reprodução pode ser devida a basicamente dois fatores: a) incapacidade de iniciar agerminação; b) incapacidade de duplicar macro moléculas críticas para seu metabolismo.
As bactérias podem permanecer viáveis na forma de esporos durante anos, se mantidos a temperaturas usuais e em estado seco. Entretanto, assim que o ambiente se torna favorável, estes esporos podem voltar a se reproduzir e multiplicar.
E a bactéria utilizada nessa prática para a observação de seu esporo, é aBacillus subtilis. Ela é uma espécie de bactéria gram-positiva que é uma saprófita comum do solo e da água. Organismo esporulado, não patogênico, graças à sua termofilia é utilizado no monitoramento e validação de ciclos de esterilização por calor seco e óxido de etileno, realizados em estufas ou fornos de esterilização e autoclaves para gás óxido de etileno, respectivamente.

Objetivos:

Realizarcoloração diferenciada e seletiva dos esporos de células bacterianas.
Entender o mecanismo de ação dos corantes nesse tipo de técnica.
Estudar a importância dos esporos, sua composição e mecanismo de formação.

Materiais e Reagentes:

1 – Lâmina de Vidro
1 – Alça Bacteriológica
1 – Bico de Bunsen
1 – Microscópio Ótico
1 – Becher de 250 mL
Água Destilada
Verde de Malaquita
SafraninaÓleo de Imersão
B. subtilis

Procedimentos:

Pegou-se uma lâmina de vidro e, sobre ela, adicionou-se uma gota de água destilada. Com o auxílio de uma alça bacteriológica previamente flambada, em uma área estéril, retirou-se uma amostra de uma colônia da bactéria Bacillus subtilis e esfregou-as na lâmina de vidro.
Com o auxílio do Bico de Bunsen secou-se o material da lâmina a fim de matare fixar os microrganismos presentes na mesma.
Montou-se um sistema com um becher contendo água. Colocou-se o mesmo em aquecimento por Bico de Bunsen. Quando a água começou a entrar em ebulição, colocou-se a lâmina com o material microbiológico já fixado apoiada na boca do becher e adicionou-se o corante Verde de Malaquita. Deixou-se a lâmina nesse sistema de aquecimento por 10 (dez) minutos,...
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