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Identificação de genes cry de Bacillus thuringiensis

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ÁREAS BÁSICAS

IDENTIFICAÇÃO DE GENES C RY D E B ACILLUS THURINGIENSIS
NO CONTROLE DE S PHENOPHORUS LEVIS , O BICUDO
DA CANA-DE-AÇÚCAR ( 1 )

ELAINE APARECIDA SILVA CÍCERO (2); ANTONIO SERGIO FERRAUDO (3*);
MANOEL VICTOR FRANCO LEMOS (2)

RESUMO
A bactéria B . thuringiensis c aracteriza-se pela produção de proteínas tóxicasa representantes de
diversas ordens de insetos, as quais são codificadas por genes c ry. Este trabalho foi realizado com objetivo
de selecionar isolados de B . thuringiensis , por meio da caracterização morfológica e molecular,
identificando as diferentes subclasses dos genes c ry3 e c ry35 e d eterminar a patogenicidade contra
Sphenophorus levis , uma das mais importantes pragas da cultura dacana-de-açúcar. Foram utilizados
1163 isolados de B . thuringiensis e c om a observação em microscópio com contraste de fases foram
confirmadas como pertencentes à espécie de B . thuringiensis. O material genético foi purificado pela matriz
de troca iônica “Instagene Matrix” e submetido a PCR com iniciadores gerais c ry3 e c ry35 i dentificandose 30 isolados contendo genes com potencial para ocontrole de coleópteros, os quais juntamente com as
linhagens-padrão de B . thuringiensis v ar. t enebrionis, B. thuringiensis v ar. m orrissone e B . thuringiensis v ar.
tolworthi f oram utilizados para a realização do bioensaio. Através de análise discriminante alocaram-se
os isolados em quatro grupos quanto à toxicidade de B . thuringiensis. Os grupos ficaram assim definidos:
um grupo quepromovem até 10% de mortalidade contendo as testemunhas e duas linhagens; u m grupo
que causou 39% de mortalidade contendo três linhagens padrão e dez isolados; um grupo com 52% de
mortalidade contendo treze isolados e um grupo com 70% de mortalidade contendo cinco isolados, os
quais devem ser considerados promissores no controle biológico de S . levis.
Palavras-chave: P CR, bioensaio,controle biológico.

( 1) Recebido para publicação em 13 de novembro de 2008 e aceito em 28 de maio de 2009.
( 2) Universidade Estadual Paulista, Departamento de Biologia Aplicada à Agropecuária. E-mail: biologia_elaine@hotmail.com;
mvictor@fcav.unesp.br
(3 ) Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Departamento de Ciências Exatas, Via de
Acesso Prof. PauloDonato Castellane, s/n, 14884-900 Jaboticabal (SP). E-mail: ferraudo@fcav.unesp.br (*) Autor correspondente.

Bragantia, Campinas, v.68, n.4, p.817-823, 2009

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E.A.S. Cícero et al.

ABSTRACT
IDENTIFICATION OF CRY GENES FROM BACILLUS THURINGIENSIS EFFECTIVE
AGAINST SPHENOPHORUS LEVIS, THE SUGAR-CANE BORER
Bacillus thuringiensis i s well known for its ability to produce toxic proteinsto different insect orders
which are encoded by the c ry g enes. This work was carried out aiming to select among different B .
thuringiensis i solates, by morphological and molecular characterization, identifying different classes of
cry3 a nd c ry35 g enes, and to determine the level of pathogenicity against S phenophorus levis l arvae, which
is one of the most important sugar-cane pests inBrazil. A total of 1163 bacterial isolates were used in
this survey in which phase microscopy and molecular markers were used for evaluation that resulted
in 30 isolates positive for c ry3 a nd c ry35 g enes potentially active against coleopterans. These bacterial
isolates together with type strains such as B . thuringiensis v ar. t enebrionis, B .t. v ar. m orrissone e B .t. v ar.
tolworthi were used in bioassays using S phenophorus levis l arvae. Using discriminating analysis four groups
of isolates were produced when B . thuringiensis t oxicity was taken into account. These groups involved
one set of two isolates with up to 10% mortality; another set caused mortality of up to 39% and was
made up of ten isolates and three type strains; another set caused mortality of up to 52%...
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