Eletroforese

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS
DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
SETOR DE FISIOLOGIA VEGETAL









ELETROFORESE







EMANUELA GARBIN MARTINAZZO
SARA DOUSSEAU
SUERLANI A. FERREIRA MOREIRA
THIAGO CORREA DE SOUZA



Lavras, MG
SETEMBRO, 2007
EMANUELA GARBIN MARTINAZZO
SARA DOUSSEAU
SUERLANI A. FERREIRA MOREIRATHIAGO CORREA DE SOUZA













ELETROFORESE











Relatório de aulas práticas, apresentado como requisito parcial, das exigências da disciplina Laboratório de Bioquímica e Metabolismo de Plantas – DBI 581, do curso de Fisiologia Vegetal/Agronomia, nível de Mestrado.



Profº Dr. Luiz Édson Mota deOliveira

Drº Alessandro Carlos Mesquita











Lavras, MG
DEZEMBRO, 2007
SUMÁRIO


1. Introdução...........................................................................................................04
2. Referencial Teórico.............................................................................................05
2.1 A eletroforesepode ser usada para separar moléculas com carga...................................05
2.2 Fundamentos práticos........................................................................................... 09
2.2.1 Corrente elétrica................................................................................................ 09
2.2.2 A eletroforese é realizada comsuportes..................................................................10
2.2.3 A velocidade de migração das cargas é influenciada por diversos fatores...........................12
2.2.4 Porosidade de géis............................................................................................ 13
2.2.5 Mobilidade dos íons........................................................................................... 14
2.3Tipos de Eletroforese....................................................................................... 15
2.3.1 NATIVA-PAGE.................................................................................................. 15
2.3.2 SDS-PAGE........................................................................................................15
2.3.2 FocalizaçãoIsoelétrica.........................................................................................16
2.3.4 Método Bidimensional......................................................................................... 17
2.3.5 Western Blotting.................................................................................................18
3. Realização daEletroforese.................................................................................19
4. Referências Bibliográficas..................................................................................20




1 Introdução



Grande parte das pesquisas atuais em biologia estuda aspectos ligados às proteínas e aos ácidos nucléicos. Essas macromoléculas têm uma característica bastante importante: apresentam várias regiões (grupamentos) comcargas elétricas.
As proteínas apresentam tanto grupamentos com cargas positivas quanto grupamentos com cargas negativas, provenientes dos aminoácidos que as constituem. As cargas são resultados da ligação ou perda de prótons. Os prótons (H+) são íons com carga positiva. Alguns grupos são neutros e ao receberem um próton, tornam-se positivos (é o caso do grupo -NH2, que, ligando-se a prótons, éconvertido a -NH3+). Outros grupos são neutros, mas ao perderem um próton, tornam-se negativos (é o caso do grupo -COOH, que se converte em -COO-). Estas perdas e adições dependem do pH do meio em que a proteína se encontra.
A somatória das cargas de todas as regiões carregadas de uma proteína confere uma carga total à proteína, sendo que esta carga total da proteína, pode variar...
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