Eletroforese

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O que é eletroforese e para que é usada?
ABR 10
Publicado por Moderador

Gel de eletroforese. Note as bandas marcadas (Foto: PNNL - Pacific Northwest National Laboratory)
A eletroforese em gel é uma técnica usada para separar moléculas com tamanhos  e cargas diferentes. Ela é bastante útil quando queremos analisar o tamanho das moléculas obtidas ou checar o resultado de uma amplificação deDNA.
Basicamente consiste em aplicar um gel  que servirá como matriz  (algo semelhante à ummingau de maisena) para separar diferentes moléculas através do seu peso molecular por meio da aplicação de um campo elétrico. Cada mistura de DNA ou proteínas é colocada em poços diferentes do gel, e o gel é então colocado em placas de vidros que contém soluções tampões onde é submetido à diferença depotencial. Moléculas de pequeno peso molecular irão migrar para o pólo oposto mais rapidamente que moléculas maiores. Pense no emaranhado de cordas em que  os menores conseguem atingir o outro lado mais rapidamente, pois ficam menos retidos nos obstáculos formados à passagem.
Depois que a corrida das moléculas está terminada, gel é exposto á luz UV e os fragmentos são vistos no gel em bandas, quecorrespondem a diferentes tamanhos dos fragmentos de moléculas utilizadas.
Existem duas variantes da técnica. Abaixo trataremos resumidamente:
Eletroforese para análise do DNA
O DNA apresenta uma carga essencialmente constante por unidade de massa, assim estas moléculas podem ser separadas em géis de agarose ou de poliacrilamida em função somente de seu tamanho ou conformação espacial. Os géis sãoutilizados como matriz, por onde serão corridas as amostras com fragmentos de diferentes tamanhos, neste sentido os géis atuaram com “crivos moleculares”, impedindo o deslocamento das moléculas de um pólo ao outro da cuba de eletroforese. Quanto maior for a molécula mais difícil será a passagem da mesma pelo emaranhado do gel. O procedimento para separar RNA e proteínas segue o mesmo princípio.Eletroforese para análise de proteínas
A eletroforese também pode ser utilizada para a análise de proteínas. Proteínas apresentam diferentes, cargas totais líquidas dependendo do conjunto de aminoácidos que as compõem, assim como conformações espaciais que varia de acordo com suas funções desempenhadas no organismo. O desenvolvimento de técnicas para se separar proteínas somente foi possível com autilização de um detergente denominado SDS (Dudecil Sulfato de Sódio) que carrega as proteínas negativamente. Esta técnica utiliza o gel de poliacrilamida como matriz, que apresenta ligações altamente cruzadas, que dificultam a passagem das moléculas e tornando mais eficaz a separação de fragmentos menores. A técnica é mais comumente chamada deeletroforese de poliacrlamida-SDS.
As moléculasde SDS quando em solução ligam-se às regiões hidrofóbicas das moléculas protéicas, causando o seu desdobramento em cadeias polipeptídicas mais simples e estendidas e carregando-as negativamente a proteína.  Além do detergente SDS é adicionado também o β- mercapto etanol, um agente utilizado para romper as ligações dissulfeto nas proteínas (formado entre átomos de enxofre – é representado por S-S).Funcionamento da técnica
* As proteínas do mesmo tamanho molecular tendem a migrar a velocidades similares já que todas se encontram em conformações espaciais simples.
* As proteínas ligam-se a mesma quantidade de SDS tendo, portanto a mesma carga líquida total.
* Proteínas com cargas maiores tendem a ter sua migração retardada na sua passagem pela matriz do gel.

Cubas onde é realizadaa técnica
http://biointerativas.wordpress.com/2009/04/10/o-que-e-eletroforese/

Eletroforese
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Por Luiz Ricardo dos Santos |
A eletroforese é uma técnica analítica utilizada na análise de  macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos. Essa técnica foi descoberta e empregada pela primeira vez em 1937 por Arne Tisélius um bioquímico russo. O efeito eletroforético tem como base a...
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