Dna chips

SUMÁRIO
• • • • • • Introdução e Constituição Técnica Aplicações Vantagens e Desvantagens Conclusão Bibliografia

INTRODUÇÃO E CONSTITUIÇÃO
• DNA Chips ou DNA microarrays são um arranjo pré-definido de sequências de DNA, inseridas em spots, quimicamente ligadas a uma superfície sólida.

• A superfície sólida é constituída por lâminas de vidro revestidas com compostos que conferem carga positiva ou membranas de nylon positivamente carregadas.
• Utilizados na detecção e quantificação de ácidos nucleicos (mRNA na forma de cDNA) provenientes de amostras biológicas, as quais irão sofrer hibridação com o DNA fixado no chip.

TÉCNICA
• Esta tecnologia permite ao investigador determinar quais os genes expressos por uma célula ou tecido.

• As moléculas de cDNA são obtidas a partir das moléculas de mRNA isoladas da amostra em estudo, com a acção da enzima transcriptase reversa na presença de nucleótidos aminoacil.

• A detecção é possível pois as sequências de cDNA são marcadas nas lâminas de vidro com fluorocromos cianina 3 (Cy3) e cianina 5 (Cy5), ou com o isótopo 33-P, quando os chips são preparados em membranas de nylon.
• Segue-se a hibridação, onde se deve ter em atenção alguns parâmetros: - temperatura - tempo de hibridação - concentração de sais - pH da solução -presença ou ausência de agentes desnaturantes (p.e. formaldeído)

• Após a hibridação faz-se uma lavagem, onde são eliminadas as sequências de cDNAs que não sofreram hibridação. • As sequencias-alvo marcadas, que se ligaram a uma sequência do DNA Chip, geram um sinal.

• O sinal gerado depende da eficiência da hibridação, determinada pelo número de bases emparelhadas, pelas condicões da hibridação e pela lavagem após a hibridação.

• O sinal é obtido por meio de leitores (scanners), a laser para os fluorocromos ou leitores de fósforo para o isótopo 33-P, que medem a intensidade do sinal de cada spot.

APLICAÇÕES
 Identificação de genes num tecido ou célula.  Determinação do