DETERMINAÇÃO QUANTITATIVA DA CREATININA (PONTO FINAL E CINÉTICA).

DETERMINAÇÃO QUANTITATIVA DA CREATININA (PONTO FINAL E CINÉTICA).

1-OBJETIVOS:
Dosar creatinina através do plasma do paciente pelo aparelho Espectrofotômetro com metodologia cinética de 2 pontos.

2-INTRODUÇÃO:

A creatinina é um importante parâmetro para diagnosticar vários problemas renais, um dos exames mais solicitados no laboratório de análises clínicas, realizado no sangue e na urina, a creatinina é um composto orgânico nitrogenado não proteico formado a partir da desidratação da creatina. A Inter conversão de fosfocreatina e creatina é uma característica particular do processo metabólico da contração muscular. Uma parte da creatina livre no músculo não participa da reação e é convertida espontaneamente em creatinina.

2.1-Principio da Técnica:
A creatinina presente na amostra reage com o ácido pícrico em meio alcalino formando um composto corado, sendo medida a velocidade com que o complexo corado se forma (Absorbância medida a 510nm) que será utilizada nos cálculos.

3-Materiais e Métodos:
Espectrofotômetro
Pipetas graduadas
Tubos de Ensaios
Banho Maria
Agua destilada

3.1-Procedimento Técnico:
Metodologia Cinética colorimétrica de Ponto Final
Ajustar o comprimento de onda para 510nm
Identificar 4 tubos de ensaio com amostra duplicada
Com Padrão, Teste1 e Teste 2 ,e Branco.

BRANCO
PADRÃO
TESTE 1
TESTE 2
PADRÃO 1
-
0,25 ml

AMOSTRA
-
-
0,25ml
0,25ml
ÁGUA DESTILADA
0,25ml
-

TAMPÃO ALCALINO
2,0ml
2,0ml
2,0ml
2,0ml
ÁCIDO PÍCRICO
0,5ml
0,5ml
0,5ml
0,5ml

3.2-Homogeneizar bem incubar a 370C por 10 min. Efetuar Leituras em 510nm. Esta é a Absorbância A1
ACIDIFICANTE
0,1 ML
0, 1 ml
0,1 ml

Homogeneizar bem aguardar 5 minutos efetuar nova leitura do tubo teste em 510nm, acertando o zero com o branco.
Esta será a segunda leitura do Teste A2 .
*Padrão de creatinina: 3mgIdl
4-CALCULOS:
Concentração do Padrão: 3 ml
Concentração do Teste
Absorbância do teste A1-A2
Fator de calibração: (FC)= Cp