Determinação do nível de proteínas totais no plasma

OBJETIVO
Recolher amostras de sangue de colegas e determinar a quantidade de proteínas totais no plasma através do método espectrofotométrico empregando biureto.
INTRODUÇÃO
No método do biureto para medida das proteínas totais no plasma, é usada a espectrofotometria.
O conjunto das absorbâncias dos vários comprimentos de onda para um composto chama-se espectro de absorção e varia de substância para substância, a espectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substâncias com base no seu espectro como também quantificá-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida está relacionada com a concentração da substância. Existe então princípios de absorção da luz:
A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por ela atravessada;
A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe luminoso através das amostras; A absorvência da luz a cada comprimento de onda é diretamente proporcional à concentração da solução contida na cubeta. Esta linearidade deixa de ocorrer com concentrações muito elevadas da substância, podendo nestes casos diluir previamente a amostra a ser medida.
Com alguma frequência é necessário quantificar substâncias em misturas complexas, ou que não absorvem significativamente a luz a nenhum comprimento de onda. Nestes casos utilizam-se os chamados métodos colorimétricos, o composto a ser quantificado é posto em contato com um reagente específico, de modo a desenvolver uma cor cuja intensidade é diretamente proporcional à concentração da substância na mistura original. Por exemplo, para quantificar proteínas numa solução pura pode medir-se a absorbância a 280µm, sendo esta proporcional à concentração de proteína. Mas se quisermos saber a concentração de proteína num extrato impuro, este método já não pode ser utilizado, porque outras substâncias, como por exemplo, os ácidos nucléicos, também absorvem a este comprimento de onda. Neste caso, podemos utilizar, por exemplo, o reagente