Determinação de parâmetros cinéticos de reações catalisadas por enzimas

1. Introdução:

As enzimas são compostos com uma alta capacidade catalítica, que atuam com grande eficiência no aumento da velocidade de diversas reações. O mecanismo de ação das enzimas é explicado por meio da reação desta com o seu substrato. Quando ocorre a ligação entre estas duas espécies, e o complexo enzima-substrato é formado, a energia de ativação da reação é diminuída e, consequentemente, a velocidade da reação aumenta. A polifenoloxidase é um exemplo de enzima encontrada nas batatas, maçãs e bananas, é a enzima responsável pelo escurecimento dos frutos e vegetais depois de cortados e expostos ao oxigênio, um processo chamado de escurecimento enzimático. O escurecimento resulta da reação entre a polifenoloxidase e fenóis existentes no alimento, como por exemplo, o catecol que é oxidado à quinona e água, como na reação abaixo:

A quinona, por sua vez, é um composto que possui uma considerável absorção de luz na região de comprimento de onde na faixa de 458 nm, o que possibilita a sua quantificação a partir do uso de um espectrofotômetro. Relacionando a quantidade de enzima polifenoloxidase adicionada na forma de extrato de batata, com a quantidade de quinona no final da reação é possível medir a eficiência desta enzima. 2. Objetivos:

Acompanhar um processo reacional por espectrofotometria. Determinar os parâmetros cinéticos de reações catalisadas por enzimas. 3. Experimental:

Primeiramente, foi anotada a temperatura em que foi realizado o experimento. Foram preparadas soluções com catecol 0,05mol/L em diversas concentrações, variando o volume de catecol em: 0,5mL, 0,75 mL; 1,0mL; 1,5 mL, em cada uma acrescentou-se 1 gota de H2O2 10%v/v e completou-se para 3mL com água.
Em uma solução de cada vez, foram pingadas alguns gotas de extrato de batata previamente preparado. O espectrofotômetro foi ajustado para λmáx = 458 nm. Anotou-se a absorbância e a cada 20 segundos colheram-se os dados, até 6 min. O