Determinação de um protocolo para análise de dna em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando e. coli para produção de pró-insulina humana recombinante

Disponível somente no TrabalhosFeitos
  • Páginas : 33 (8013 palavras )
  • Download(s) : 0
  • Publicado : 10 de outubro de 2011
Ler documento completo
Amostra do texto
Dayane Ferreira Santos

Determinação de um protocolo para análise de DNA em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando E. coli para produção de pró-insulina humana recombinante

Monografia apresentada ao Curso de Engenharia Química da Faculdade de Ciência e Tecnologia de Montes Claros, como parte dos requisitospara obtenção do diploma de Engenheiro Químico.

Orientador: Prof. William James Nogueira Lima

Montes Claros
2007
FUNDAÇÃO EDUCACIONAL MONTES CLAROS

Faculdade de Ciência e Tecnologia de Montes Claros

Dayane Ferreira Santos

Determinação de um protocolo para análise de DNA em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando E. coli para produção depró-insulina humana recombinante

Esta monografia foi julgada adequada como parte dos requisitos para a obtenção do diploma de engenheiro químico aprovada pela banca examinadora da faculdade de ciência e tecnologia de montes claros.

____________________________________________________
Prof. Sandra Matias
Coord. do Curso deEngenharia Química

Banca Examinadora

Prof. William James Nogueira Lima, FACIT
(Orientador) _______________________________

Prof. Elbi Bernardes de Queiroz Junior, FACIT _______________________________

Prof. João Carlos Gonçalves, FACIT ________________________________

Montes Claros, 06 dedezembro de 2007

Dedico este trabalho aos meus pais, Waldeci e Sônia, e aos meus irmãos, Wendell e Tathyane.

Agradecimentos

À Deus por iluminar meu caminho e me dar forças para seguir sempre em frente.
Ao professor William James pelo incentivo e orientação durante a elaboração deste trabalho.
À Malu por tudo que me ensinou durante este ano.À todos da BIOMM S/A pela convivência e amizade durante o estágio.
À todos os colegas de turma pelos agradáveis momentos vividos e pelo grande elo de amizade formado.
Aos meus pais e irmãos que sempre me apoiaram em cada etapa da minha vida, me ajudando e me incentivando em tudo.
Aos funcionários e docentes da FACIT / FEMC que de alguma forma contribuíram para o meucrescimento pessoal e profissional.

RESUMO

Neste trabalho foram analisadas amostras de homogeneizado obtidas em processo fermentativo utilizando a bactéria Escherichia coli recombinante. Essas amostras foram analisadas em seu conteúdo de proteína total, proteína de fusão (pró-insulina humana recombinante) e concentração de DNA. Para determinação de proteína total utilizou-se o método de Bradford. Adeterminação da quantidade de proteína de fusão contida nas amostras foi possível utilizando a técnica de eletroforese em gel (SDS-PAGE). As análises revelaram que uma parte significativa de proteína de fusão é perdida na operação de centrifugação. O objetivo deste trabalho foi elaborar um protocolo de determinação da concentração de DNA nas etapas de pré-purificação da proteína recombinante porespectrofotometria. Para isolamento do DNA bacteriano utilizou-se a técnica de extração fenol-clorofórmio. Os resultados da análise mostraram que parte significativa do DNA recombinante, entre 85 e 90%, é descartado nas etapas de pré-purificação. As análises de proteínas totais e de fusão, bem como as de concentração de DNA, demonstraram-se eficientes para análise qualitativa das amostras doprocesso de pré-purificação. Foi desenvolvido um protocolo para determinação da concentração de DNA. Para que não haja problemas nas etapas cromatográficas, a concentração de DNA deve ser mantida abaixo de 20%.

Palavras-Chave: homogeneizado, E. Coli, recombinante, proteína total, proteína de fusão, DNA, centrifugação.

ABSTRACT

In this work, samples from homogenized of a fermentation...
tracking img