Determinação de um protocolo para análise de dna em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando e. coli para produção de pró-insulina humana recombinante

Páginas: 33 (8013 palavras) Publicado: 10 de outubro de 2011
Dayane Ferreira Santos

Determinação de um protocolo para análise de DNA em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando E. coli para produção de pró-insulina humana recombinante

Monografia apresentada ao Curso de Engenharia Química da Faculdade de Ciência e Tecnologia de Montes Claros, como parte dos requisitospara obtenção do diploma de Engenheiro Químico.

Orientador: Prof. William James Nogueira Lima

Montes Claros
2007
FUNDAÇÃO EDUCACIONAL MONTES CLAROS

Faculdade de Ciência e Tecnologia de Montes Claros

Dayane Ferreira Santos

Determinação de um protocolo para análise de DNA em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando E. coli para produção depró-insulina humana recombinante

Esta monografia foi julgada adequada como parte dos requisitos para a obtenção do diploma de engenheiro químico aprovada pela banca examinadora da faculdade de ciência e tecnologia de montes claros.

____________________________________________________
Prof. Sandra Matias
Coord. do Curso deEngenharia Química

Banca Examinadora

Prof. William James Nogueira Lima, FACIT
(Orientador) _______________________________

Prof. Elbi Bernardes de Queiroz Junior, FACIT _______________________________

Prof. João Carlos Gonçalves, FACIT ________________________________

Montes Claros, 06 dedezembro de 2007

Dedico este trabalho aos meus pais, Waldeci e Sônia, e aos meus irmãos, Wendell e Tathyane.

Agradecimentos

À Deus por iluminar meu caminho e me dar forças para seguir sempre em frente.
Ao professor William James pelo incentivo e orientação durante a elaboração deste trabalho.
À Malu por tudo que me ensinou durante este ano.À todos da BIOMM S/A pela convivência e amizade durante o estágio.
À todos os colegas de turma pelos agradáveis momentos vividos e pelo grande elo de amizade formado.
Aos meus pais e irmãos que sempre me apoiaram em cada etapa da minha vida, me ajudando e me incentivando em tudo.
Aos funcionários e docentes da FACIT / FEMC que de alguma forma contribuíram para o meucrescimento pessoal e profissional.

RESUMO

Neste trabalho foram analisadas amostras de homogeneizado obtidas em processo fermentativo utilizando a bactéria Escherichia coli recombinante. Essas amostras foram analisadas em seu conteúdo de proteína total, proteína de fusão (pró-insulina humana recombinante) e concentração de DNA. Para determinação de proteína total utilizou-se o método de Bradford. Adeterminação da quantidade de proteína de fusão contida nas amostras foi possível utilizando a técnica de eletroforese em gel (SDS-PAGE). As análises revelaram que uma parte significativa de proteína de fusão é perdida na operação de centrifugação. O objetivo deste trabalho foi elaborar um protocolo de determinação da concentração de DNA nas etapas de pré-purificação da proteína recombinante porespectrofotometria. Para isolamento do DNA bacteriano utilizou-se a técnica de extração fenol-clorofórmio. Os resultados da análise mostraram que parte significativa do DNA recombinante, entre 85 e 90%, é descartado nas etapas de pré-purificação. As análises de proteínas totais e de fusão, bem como as de concentração de DNA, demonstraram-se eficientes para análise qualitativa das amostras doprocesso de pré-purificação. Foi desenvolvido um protocolo para determinação da concentração de DNA. Para que não haja problemas nas etapas cromatográficas, a concentração de DNA deve ser mantida abaixo de 20%.

Palavras-Chave: homogeneizado, E. Coli, recombinante, proteína total, proteína de fusão, DNA, centrifugação.

ABSTRACT

In this work, samples from homogenized of a fermentation...
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