Cromatografia em coluna

UNIVERSIDADE ATLÂNTICA - ESCOLA SUPERIOR DE SAÚDE ATLÂNTICA Lic.ª em Análises Clínicas e Saúde Pública
INTRODUÇÃO ÀS TÉCNICAS LABORATORIAIS

Protocolo para o 2º Trabalho Prático

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

Objectivo Separação dos pigmentos do colorau por cromatografia em coluna.

Material e Reagentes Gobelets Pipetas Tubos de ensaio pequenos Coluna de cromatografia Esguicho com água destilada Algodão em rama Celite Sílica gel Mistura de pigmentos Éter de petróleo Acetona Solução 1:1 de éter de petróleo / acetona.

Procedimento 1. Coloque uma “rolha” de algodão no fundo da coluna. Deite uma pequena camada de celite em cima do algodão, embebendo em seguida com éter de petróleo. 2. Num gobelet de 100 mL, prepare uma papa de sílica com éter de petróleo. 3. Com muito cuidado, deite a papa na coluna de vidro, não deixando secar a sílica, observando à medida que vai depositando e tendo o cuidado de que não fiquem bolhas de ar no enchimento da coluna. A altura final deve ser cerca de 10 cm. 4. Quando a sílica tiver acamado e com cerca de 1 cm de éter de petróleo acima da superfície da sílica, deite uma pequena quantidade de celite, para proteger o topo da coluna. 5. Lentamente e com muito cuidado, com uma pipeta de Pasteur, adicione à coluna 1 mL da mistura a separar. Escoe um pouco, abrindo a torneira da coluna e, quando esta solução estiver a
UATLA/ESSATLA 2º Trabalho I.T.L Ana Cláudia Sousa/Sandra Félix

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cerca de 1 cm da superfície da sílica, lave a parte superior da coluna com 1 mL de éter de petróleo, escoando em seguida para que toda a mistura fique embebida no adsorvente. 6. Adicione mais éter de petróleo à coluna (uma altura de cerca de 10 cm acima da superfície da sílica) e elua o primeiro componente (banda amarela), recolhendo fracções de eluato de cerca de 5 mL, numa série de tubos de ensaio. 7. Adicione à coluna cerca de 10 mL da mistura de eluentes e, em seguida, acetona. 8. Continue a recolher fracções de eluato como anteriormente, até