coloração de gram

COLORAÇÃO DE GRAM

Objetivo: Observar formas, disposição e comportamento tintorial das bactérias. Distinguir bactérias Gram-positivas das Gram-negativas

Princípio: O método de Gram permite classificar as bactérias em dois grandes grupos: as que retêm Violeta de genciana ( Gram-positiva ) e as que não retém o violeta genciana (Gram-negativa). Além do mais, é útil para determinar a forma ( cocos e bacilos ), e o arranjo das células após a divisão celular ( em forma de cacho, cadeias, sarcina etc., ). As células bacterianas são caracterizadas morfologicamente:
•Comportamento tintorial: Gram-positiva ou Gram-negativa
•Forma: cocos (esféricos), bacilos (cilindricos) e espirilos (espiralados)
•Arranjo: Disposição das células entre si. Os cocos podem estar isolados, aos pares(diplococos), agrupados em cachos (estafilococos), em cadeia (estreptococos). Os bacilos e espirilos se apresentam em geral como células isoladas porém, ocasionalmente, pode-se observar bacilos aos pares (diplobacilos) ou em cadeia ( estreptobacilos ).

Quanto ao tamanho, as células bacterianas são sempre de dimensões microscópicas, o diâmetro da maioria delas varia de 0,2 a 1,5 mm e comprimento de 1 a 6 mm.

Material: Reagentes de Gram: sol. cristal-violeta 2%; sol. aquosa de iodo (Lugol); mistura álcool-acetona; sol. alcoólica de safranina[1], Lâminas: Suporte para lâminas; alça de platina; Bico de Bunsen; Microscópio; Óleo de Imersão

Método:
•Preparar o esfregaço e fixar ao calor
•Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de 1min.;
•Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;
•Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto;
•Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor;
•Cobrir o esfregaço com a solução de safranina1 por cerca de 30 segundos;
•Lavar com água corrente;
•Deixar secar ao ar
•Observar ao microscópio em lente de 100X, com óleo