Coloração de esfregaços pela técnica de Gram

1. Objetivo
Descrever a técnica de coloração de esfregaços de produtos biológicos pelo método de GRAM

2. Âmbito
Aplica-se a todos os TDT do serviço de Patologia Clínica

3. Definições
TDT- Técnico de Diagnóstico e Terapêutica

4. Principio
O exame microscópico de preparações coradas permite precisar as características morfológicas das bactérias (forma e afinidade para os corantes).
A coloração de GRAM é uma coloração diferencial porque permite diferenciar as bactérias em GRAM positivas e em GRAM negativas.
Após o tratamento com cristal violeta e lugol forma-se no interior da célula um complexo que se designa por laca. Esta laca é insolúvel na água, mas moderadamente solúvel em álcool acetona , usado como descorante.
As bactérias GRAM negativas devido ao facto de terem mais lípidos na parede celular são permeáveis à saída da laca por acção de um diferenciador (álcool acetona) enquanto que as GRAM positivas não são permeáveis, conservando-se a laca no seu interior.
As bactérias que resistem à descoloração e tomam a cor do 1º corante são as Gram positivas.
As espécies que ficam descoradas, são coradas com fucsina básica, onde tomam a cor rosa, bactérias GRAM negativas.

5. Descrição
A coloração de esfregaços de produtos biológicos para observação microscópica, pelo método de GRAM, pode ser efectuada por 2 métodos , manual e automático.
Os corantes utilizados em ambos os métodos são os mesmos e vêem prontos a utilizar.

Pelo modo manual procede-se do seguinte modo:
- identificar as lâminas
- preparar o esfragaço, secar e fixá-lo ao calor (passar 3x pela chama)
- cobrir a lâmina com cristal violeta , durante 1 minuto
- lavar a lâmina com água corrente
- cobrir a lâmina com Iodina, durante 1 minuto
- lavar a lâmina com água corrente, de seguida com sol. descorante até o esfregaço ficar descorado e novamente com água corrente
- cobrir a lâmina com Safranina durante 1 minuto
- lavar a lâmina com água corrente
- deixar secar e observar ao