Coloração de gram

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Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Piauí – IFPI. Campus Teresina Zona Sul/prof. Marcílio Rangel Farias Curso: Técnico Integrado-Saneamento Ambiental Disciplina: Microbiologia Profª: Simone Gallani Rodrigues Turma: 412

COLORAÇÃO DE GRAM

Componentes:
Andreza Silva de Paula n° 04 Flaviana Alves da Silva n° 16 Tiago Rodrigues da Silva n° 34

Teresina, Janeiro de 2013. 1. INTRODUÇÃO Colorações simples tornam possível a visualização das bactérias ao microscópio, mas isso não faz distinção entre organismos de morfologia similar. Para tanto, é necessário realizar uma coloração diferencial. ¹ Existem diversos métodos de coloração utilizados para a análise de bactérias. Entre estes, o mais utilizado é a coloração de Gram, também conhecida como técnica de Gram,desenvolvida pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (18531938), em 1884, o qual permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos. ² O método é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Grampositivas de reterem o corante cristal violeta durante um tratamentocom solução de álcool-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem. ³ A coloração consiste no tratamento de uma amostra contendo bactéria ou de uma cultura bacteriana, com um corante primário, o cristal violeta, seguido de tratamento com um fixador, o lugol. Segue-se o tratamento com um solvente orgânico, o álcoolacetona. ³ O cristal violeta e o lugol formam umcomplexo cristal violeta-iodo, insolúvel denominado iodopararosanilina, o qual confere coloração roxa tanto pelas bactérias Gram-positivas, quanto as Gram-negativas. Com a adição de álcool-acetona, as bactérias Gram-negativas liberam o complexo formado, pois a camada de peptidoglicano é de pequena espessura, enquanto que as Gram-positivas retêm o complexo, permanecendo roxas. A adição de fuccina(ou safranina) não altera a cor das Gram-positivas, mas confere a cor avermelhada às bactérias Gram-negativas, que foram descoloridas pelo álcool-acetona. 4 A etapa da descoloração é critica, pois a exposição prolongada ao solvente irá provocar a remoção do cristal violeta dos dois tipos de bactérias, podendo produzir resultados falsos. A retenção ou não do corante primário dependente daspropriedades físicas e químicas das paredes celulares bacterianas tais como espessura, densidade, porosidade e integridade. ³
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Células de bactérias Gram-positivas, células velhas, mortas ou com envelopes danificados por agentes físicos ou químicos, tentem a perder o cristal violeta e uma mesma amostra bacteriana pode exibir parte ou todas as células coradas como Gramnegativas. ³ Portanto,o uso de material fresco é importante. Por outro lado, resultados do tipo “falso Gram-positivo” só são obtidos se o tratamento com solvente orgânico for omitido. ³ Esta técnica de coloração permite então a distinção entre bactérias com parede celular mais ou menos rica em peptidoglicanos, além se ser uma técnica primordial no diagnóstico microbiológico, visto que através dela se definemcaracterísticas morfológicas e tintoriais da bactéria em pesquisa. ²

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2. OBJETIVO A análise tem como objetivo classificar uma determina cultura bacteriana pelo método de Gram e relacionar a composição química da parede celular das bactérias com os corantes.

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3. MATÉRIAS E MÉTODOS 3.1 Materiais Utilizados        Lâmina; Alça de Platina; Cultura bacteriana naplaca de Petri; Microscópico óptico; Lamparina a álcool; Pisseta de Pauster; Pinça;

3.2 Reagentes Utilizados  Solução de Cristal violeta;  Solução salina a 0,9%;  Lugol;  Álcool-acetona  Solução de fucsina;  Água Destilada. 3.3 Procedimento Experimental 3.3.1 Preparo do esfregaço 1. Flambar a alça de platina mantendo-a próximo a chama. 2. Retirar uma gota da água estéril (solução...
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