Citologia

REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

No final deste trabalho prático o aluno deverá saber:
• Caracterizar a presença de aminoácidos e proteínas em material biológico.
• Detectar a presença de aminoácidos e proteínas através do emprego de métodos específicos.

MATERIAL E REAGENTES

Soluções de proteínas: clara de ovo
Reativo de Millon Acetato de Chumbo 10% e 5%
NaOH 2,5N, 0,5N e 20% Água Sanitária
HNO3 concentrado CuSO4 a 5%
H2SO4 concentrado Etanol
NaCl a 0,9g% (NH4)2SO4 a 76,6 g%
-Naftol a 1% em álcool a 50%

PROCEDIMENTOS

 Solução de proteínas: Clara de Ovo a 10% v/v com salina (NaCl a 0,9 g%).

1. TESTE DO BIURETO

Técnica:

Tubos Sol. de Proteínas NaOH 2,5N CuSO4 a 1% Cor observada
1 1 ml 5 gotas Algumas gotas
2 - 5 gotas Algumas gotas - Desenvolvimento de uma coloração característica de reação positiva. - Descreva a coloração observada em cada um dos tubos, explicando o significado de cada uma delas.

2. REAÇÃO DE SAKAGUCHI

Técnica:
Pipetar em um tubo de ensaio 1 ml de solução de proteínas e adicionar 10 gotas de NaOH 2,5N, 2 gotas de -Naftol a 1% e 1 ml de Hipoclorito de Sódio. - Desenvolvimento de uma coloração característica de reação positiva. - Descreva a coloração observada, explicando o seu significado.

3. REAÇÃO XANTOPROTEICA

Técnica:
Em tubo de ensaio pipetar 1 ml de solução de proteínas, juntar 13-15 gotas de ácido nítrico concentrado e ferver. Acrescentar em seguida, 4 ml de NaOH a 20%. - Desenvolvimento de uma coloração característica de reação positiva. - Descreva a coloração observada, explicando o seu significado.

4. REAÇÃO DE MILLON

Técnica:
Pipetar 1 ml de solução de proteínas e algumas gotas (3 a 4) do reativo de Millon. As proteínas precipitarão pela adição do ácido forte e do mercúrio. Leve o tubo diretamente à chama. As proteínas precipitadas formarão massa