Biologia

Análise de água (Método dos tubos Múltiplos) NMP/100 ml ( Número Mais Provável)

Enumeração de Coliformes Totais, fecais e Escherichia coli.
Prof. Ms Cleber Rogeres de Andrade

Para água potável, a legislação brasileira prevê a ausência de microrganismos coliformes em 100 ml de amostra. Os coliformes são utilizados como microrganismos indicadores de higiene, sendo definidos como bacilos gram negativos, aeróbios ou anaeróbios facultativos, não esporulados e que produzem gás a partir de lactose, após 48 h a 35 ° C.

Família: Enterobacteriaceae
Gêneros : Escherichia, Enterobacter, Citrobacter e Klebsiela

Coleta de água para análise

As amostras de água serão coletadas em frascos estéreis. No caso de água tratada, será adicionado ao frasco, antes da esterilização, 0,1 mL de tiossulfato de sódio 10%. Esta quantidade é suficiente para neutralizar o cloro residual de 100 mL de água.

1) Teste presuntivo para coliformes

Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST)

O LST possui alguma seletividade para organismos coliformes devido à presença do lauril sulfato, mas ainda permite a recuperação de bactérias que possam estar injuriadas ( expostas a condições adversas como a presença de cloro).

Para análise de água utiliza-se 10 tubos com 10 mL de LST dupla concentração, contendo um tubo invertido ( tubo de Durham) que aprisionará o gás que poderá ser produzido a partir da fermentação da lactose presente no meio de cultura. Os tubos inoculados são incubados a 35 ° C por 48 h e são observados para a produção de gás.

2) Teste confirmativo para coliformes totais

Caldo Lactose Bile Verde Brilhante (VB)

Contém sais biliares e o corante verde brilhante, sendo mais seletivo que o LST e, permitindo a confirmação da presença de coliformes totais. Novamente neste caldo é observada a produção de gás a partir da lactose.

A partir dos tubos positivos (turvos com gás) do caldo LST passa-se, com auxílio de uma alça de níquel-cromo