Avaliação de dois métodos de extração de dna

J Bras Patol Med Lab • v. 43 • n. 2 • p. 121-127 • abril 2007

ARTIgO ORIgINAL ORIgInal papER

Avaliação de dois métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação em PCR
Evaluation of two methods of DNA extraction from paraffin-embedded material for PCR amplification

Primeira submissão em 17/07/06 Última submissão em 27/10/06 Aceito para publicação em 18/01/07 Publicado em 20/04/07

Luciana Estevam Simonato1, José Fernando Garcia2, Cáris Maroni Nunes3, Glauco Issamu Miyahara4

unitermos
DNA Reação em cadeia da polimerase Tecido parafinado

resumo

Introdução: Diversos métodos para extração de DNA a partir de tecidos biológicos inclusos em parafina encontram-se descritos na literatura, sendo o sucesso desse procedimento de grande importância para a realização de métodos moleculares de diagnóstico empregando a reação em cadeia da polimerase (PCR). Objetivo: Este estudo avaliou dois métodos de extração de DNA de material parafinado, visando à amplificação do DNA genômico pela técnica da PCR. Material e método: Foram utilizadas 35 amostras de casos de carcinoma epidermóide de assoalho bucal diagnosticados e tratados no Centro de Oncologia Bucal da Universidade Estadual Paulista (Unesp). Os métodos de extração de DNA avaliados incluíram: 1. digestão com proteinase K seguida por purificação com Chelex 100® (BioRad); e 2. sistema QIAamp DNA minikit® (Qiagen). O DNA obtido foi quantificado por espectrofotometria e amplificado pela técnica da PCR, utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores para betaglobina. Resultados: A concentração de DNA obtido do material extraído com o primeiro método apresentou média de 120,62 ng/µl com razão entre as leituras das absorbâncias 260/280 variando de 0,8 a 1,41. Para as amostras extraídas com o segundo procedimento, o rendimento médio foi de 67,38 ng/µl, no entanto a razão 260/280 variou entre 1,11 e 2,53. O material foi submetido à PCR e, das 35 amostras extraídas com cada método, respectivamente, 29 e