Analises microbiologicas

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Coliformes Totais
Meio seletivo caldo lactosado – bile verde brilhante. Neste meio, os sais de bile têm a função de inibir o crescimento de bactérias não entéricas e o verde brilhante de inibir as bactérias Gram-positivas, selecionando desta forma os coliformes.
- Imediatamente após a leitura do teste presuntivo, transferir com uma alça de platina uma alíquota de cada tubo positivo para tubos (tubos de Durham invertidos no seu interior) contendo caldo lactosado bile verde brilhante.
- Incubar a 35º C por 48h
- Fazer a leitura identificando como positivos os tubos com gás.
- Usar a tabela de NMP para verificar qual o número mais provável de coliformes totais
por grama ou mL.

Coliformes Fecais
Os coliformes fecais têm em seu ambiente natural (trato intestinal) temperaturas maiselevadas. Eles são capazes de crescer a 44,5º C, possibilitando, assim, de uma forma prática, serem avaliados separadamente.
- Imediatamente após a leitura do teste presuntivo, transferir com a alça de platina uma porção de cada tubo positivo para tubos contendo caldo EC (Escherichia coli) (tubos de Durham invertido no seu interior).
- Incubar a 44,5 (pescado) ou 45º C por 24h. Utilizar obanho-maria
Fazer leitura identificando como positivo os tubos com gás usar a tabela de NMP para verificar qual o número mais provável de coliformes fecais/g ou mL.

Salmonella sp.
Todas as salmonelas são consideradas potencialmente patogênicas para o homem. A única via de entrada destes microrganismos no corpo humano é a oral, por isso é de suma importância a análise dos alimentos para detectar suapresença.
A metodologia recomendada segue 4 etapas que podem ser aplicadas a qualquer tipo de alimentos
Pré- enriquecimento em caldo não seletivo; objetiva a recuperação de células injuriadas.
- Adicionar 25g ou mL da amostra em 225 mL do caldo de pré- enriquecimento (diluição 10-1). Homogeneizar no liquidificador por 60 seg. Verter todo material em erlenmyer estéril e incubar a 35º C/ 24h.Para uso geral recomenda-se o caldo lactosado ou a água peptonada 0,1% tamponada e para produtos lácteos água destilada verde brilhante.
Enriquecimento Seletivo: estimula a multiplicação de salmonelas e reduz ou inibe o crescimento dos organismos competitivos, tais como coliformes, Proteus e Pseudomonas.
- Transferir 1,0 mL para 10mL de caldo Tetrationato (TT) .Incubar a 35º C/24h.
- Plaqueamentoseletivo diferencial: Objetiva promover o desenvolvimento preferencial de colônias de Salmonella, com características típicas que as distingam dos competidores, para posterior confirmação sorológica e bioquímica.
- Agitar o tubo de enriquecimento seletivo e estriar uma alçada do caldo tetrationato em placas de Agar entérico de Hectoen (HE) e Ágar xilose lisina descarboxilado (XLD). Incubar asplacas invertidas a 35º C/24h. Verificar se há desenvolvimento de colônias típicas de Salmonella:

Agar HE: colônias transparentes, verde azuladas, com ou sem centro preto.

Agar XLD: colônias transparentes, cor de rosa escuro, om ou sem centro preto.
Confirmação Preliminar das colônias típicas de Salmonella com o auxílio de uma agulha de inoculação, remover uma porção da massa de células, docentro da colônia típica (no mínimo 2 colônia) e semear em tubos inclinados de Agar Lisina Ferro (LIA) e Ágar Tríplice Açúcar.. A semeadura deve ser feita por picada e estrias na rampa. Incubar os tubos a 35º C/24h.

Observar reação típica:
TSI- rampa alcalina (vermelha) e fundo ácido (amarelo),com ou sem produção de H2S (escurecimento do agar). Reação atípica que não deve ser descartada se asdemais reaçãoes em LIA se apresentarem típicas: rampa e fundo ácidos (amarelos), com ou sem produção de H2S.
LIA – fundo e rampa alcalinos (púrpura, sem alteração da cor do meio), com ou sem produção de H2S. Reação atípica, que não devem ser descartada se as demais reações em TSI se apresentarem típicas: fundo amarelado com rampa alcalina, com ou sem produção de H2S.

Teste bioquímico
Meio...
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