Agroecologia

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Tecnologia da Biologia Celular e Molecular





A biologia celular e molecular estuda objetos muito pequenos, por isso depende

inteiramente do aperfeiçoamento dos instrumentos e das técnicas de pesquisa.

Para estudo no microscópio óptico, os tecidos são fixados, cortados e corados;

as imagens obtidas podem ser armazenadas em discos de computador e processadas

Osmicroscópios de contraste de fase facilitam o exame de células vivas.

Com o microscópio confocal, é possível fazer cortes ópticos da célula e a

reconstituição tridimensional, por computação, das imagens digitalizadas de organelas e

outros constituintes celulares.

O microscópio eletrônico de transmissão tem um poder de resolução mais de 100

vezes superior ao do microscópio óptico e revelounumerosas minúcias da estrutura celular

que não eram sequer percebidas anteriormente, revolucionando os estudos sobre as células.

O microscópio eletrônico de varredura visa ao estudo das superfícies externas e

internas das células e organelas.

A imunocitoquímica é empregada para a localização de macromoléculas celulares

Nas culturas, as células podem ser mantidas vivas e proliferandopor muito tempo,

o que facilita o estudo de suas funções.

As organelas podem ser isoladas das células por centrifugação fracionada

(centrifugação diferencial).

A cromatografia em coluna é uma técnica utilizada para separar macromoléculas

A técnica de eletroforese pode ser usada para identificar macromoléculas e para

determinar o tamanho das moléculas protéicas.

Osconhecimentos sobre as células progridem paralelamente ao aperfeiçoamento

dos métodos de investigação. Inicialmente, o microscópio óptico, também chamado

microscópio de luz, possibilitou o descobrimento das células e a elaboração da teoria de que

todos os seres vivos são constituídos por células.

Posteriormente, foram descobertas técnicas citoquímicas para a identificação e

localização dediversas moléculas constituintes das células. Com o advento dos microscópios

eletrônicos, que têm grande poder de resolução, foram observados pormenores da estrutura

celular que não poderiam sequer ser imaginado pelos estudos feitos com os microscópios

Mais ou menos simultaneamente com o uso dos microscópios eletrônicos, foram

aperfeiçoados métodos para a separação de organelas celulares epara o estudo in vitro de

suas moléculas e respectivas funções. A análise de organelas isoladas em grande quantidade,

a cultura de células, a possibilidade de manipular o genoma através da adição ou supressão

de genes e o apareci­mento de numerosas técnicas de uso comum aos diversos ramos da

pesquisa biológica levaram ao surgimento do que se costuma chamar de biologia celular emolecular, que é o estudo inte­grado das células, através de todo o arsenal técnico disponível.

É impossível descrever, mesmo sumariamente, todas as técnicas utilizadas nos variados

estudos sobre as células. Cada pesquisador tem usado sua imaginação para criar abordagens

as mais variadas, de acordo com o problema a ser resolvido. Neste capítulo, apenas como

exemplos, serão estudadasalgumas técnicas que têm contri­buído de modo significativo para

o progresso da biologia celular e molecular. Para manter o livro com um tamanho razoável,

muitas técnicas importantes foram deixadas de lado.

Confecção de cortes para estudo nos microscópios óptico e eletrônico

Embora seja possível o estudo microscópico de células vivas, muitas vezes há

vantagem em obter um preparadopermanente (lâmina) no qual as células ficam preservadas,

isto é, fixadas e coradas, para melhor demonstração dos seus componentes.

Um preparado permanente ideal deveria mostrar as células com a mesma estrutura

microscópica e composição química que possuíam quando vivas. Isso, entretanto, não é

possível, e todos os preparados apresentam artefatos, que são alterações produ­zidas nas...
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