acidos

EXTRAÇÃO DE ÁCIDOS NUCLÉICOS Professor: Chris,an Reis Disciplina: Biologia Molecular

O que é extração/purificação?

A CÉLULA
E SEU
MATERIAL
GENÉTICO

ROMPIMENTO
DAS
MEMBRANAS

LIBERAÇÃO
DO
MATERIAL
NO MEIO

PURIFICA
ÇÃO DO
MATERIAL
OBTIDO

Quais são os requisitos essenciais para a obtenção dos ácidos nucléicos?

• quan&dade (rendimento) – Que quan&dade/ concentração foi ob&da de ácidos nucléicos na extração? • pureza – os ácidos nucléicos foram ob&dos com alto grau de pureza ou existem contaminantes na amostra? • integridade – as moléculas de ácidos n u c l é i c o s e s t ã o i n t e g r a s o u h o u v e degradação?

Quais são as etapas na extração/obtenção de ácidos nucléicos?

• 1a Etapa: Ruptura ou lise celular

• 2a Etapa: Desnaturação ou ina&vação de proteínas

• 3a Etapa: Separação dos ácidos nucléicos

1a Etapa: • Ruptura ou lise celular – Liberar os componentes citoplasmá,cos e/ou nucleares intracelulares.

Técnica

Exemplo

Efeito na membrana Tipo celular

Baseada em enzima Lisozima

Produz orifícios nas membranas

Bactérias

Solução

Solução salina hipotônica Produz ambiente hipotônico, que rompe membrana celular Bactérias/Geral

Detergente

SDS/NaOH

Solubiliza camada lipídica Células animais /
Bactérias

Sonicação

Ondas sonoras

Rompe membranas através de som de alta freqüência

Bactérias

Homogenização