68 Extracao De DNA Um Experimento Ambiguo

Páginas: 4 (991 palavras) Publicado: 12 de abril de 2015
EXTRAÇÃO DE DNA (1)
A EXTRAÇÃO DE DNA
Muitas pesquisas de Biologia Molecular começam com a extração de ácidos nucleicos. A lise celular
libera as moléculas em uma fase aquosa que é separada dosrestos celulares por centrifugação. As
proteínas são removidas da fase aquosa por solventes orgânicos (fenol, clorofórmio). O DNA, que
permanece na fase aquosa, é precipitado com etanol e, posteriormente,purificado e suspendido
em um buffer adequado.
A existência de kits comerciais tem mudado a rotina de muitos laboratórios. Nos kits, os solventes
orgânicos são substituídos por filtros que retém oDNA, em condições de concentração salina
elevada. A eluição do DNA retido no filtro ocorre em baixa concentração salina.

A PRÁTICA NO LABORATÓRIO DE ENSINO
Por alguma razão que nos escapa, a extração deDNA é uma atividade que entusiasma a alguns e
decepciona a outros. Provavelmente, as diferenças de opinião tenham mais a ver com a
personalidade dos alunos e suas fantasias que com a atividade emsi.
As etapas possíveis no laboratório de ensino são as seguintes:
1. Trituramento do tecido, para separar as células.
2. Lise das membranas celulares com detergente, em uma
solução salina, para liberaros ácidos nucleicos e as proteínas.
3. Digestão das proteínas por ação enzimática de proteases
(Opcional).
4. Precipitação com etanol gelado. O DNA é solúvel em álcool,
mas torna-se insolúvel napresença de sal (NaCl), porque o
sódio neutraliza a carga negativa dos grupos fosfatos. O etanol
formará uma camada na superfície por ser menos denso que a
solução aquosa.
5. Observação de agregadosmoleculares, de consistência
mucoide, na interface entre a solução aquosa e o álcool.
Os agregados moleculares obtidos são uma mistura em proporção
variável de ácidos nucleicos, proteínas e pectina, umcarboidrato
presente na lamela intercelular e no vacúolo das células vegetais.

BIBLIOGRAFIA
MADDEN D. Discovering DNA. Science in School 1: Spring 2006.
http://www.scienceinschool.org.
THE SCIENCE...
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