Eletroporação

cromossomo, para favorecer a recombinação homóloga (recombinação precisa com a seqüência idêntica no genoma), o gene mutante é então inserido em um vetor e introduzido em células tronco embrionárias (ES) em cultura por microinjeção, transfecção ou eletroporação. Recombinações resultando na substituição do gene normal ocorrem cerca de uma em cem vezes. As células recombinantes são selecionadas e injetadas em um blastocisto, o qual é introduzido em uma fêmea. Algumas das células do filhote…

como o DNA, o RNA e as proteínas. Essas substâncias a serem bombardeadas pelo revolver de genes irão modificar o genoma da planta, fazendo assim com que ela torne-se também uma planta transgênica. O terceiro método utilizado é o da Eletroporação. Feito com o auxílio de um equipamento chamado eletroporador, permite a formação de poros na membrana celular, provocados por descarga elétrica desse aparelho. Na formação dos poros, o DNA de interesse é inserido em um recipiente…

métodos, dos quais citamos: eletroporação, lipofecção e co-precipitação (precipitação com fosfato de cálcio). A escolha do método é feita de acordo com a patologia, a célula ou tecido-alvo, o tamanho e tipo de transgene (gene de interesse) a ser expresso e o tempo e quantidade de expressão que se deseja obter, entre outros fatores. I. Eletroporação O método usado em muitos laboratórios para introduzir moléculas de DNA recombinantes nas células hospedeira é a eletroporação (figura a…

características à bactéria – tais como a resistência a dados antibióticos -, a bactéria é dita transformada. Basicamente, existem dois procedimentos para realizar a transformação bacteriana: a eletroporação e a transformação com cloreto de cálcio. Ambos têm rendimentos muito reduzidos. A eletroporação é uma técnica na qual se misturam bactérias e o vetor num único tubo e aplica-se um choque elétrico na mistura, com o objetivo de desestabilizar a membrana e permitir a entrada do…

de vegetação e no campo para posterior comercialização. Diversas técnicas são conhecidas que possibilitam a inserção do gene de interesse na planta a ser transformada. Três delas são mais comumente aplicadas: eletroporação, bombardeamento e transformação via Agrobacterium. Na eletroporação o gene de interesse já preparado é colocado junto com protoplastos (células vegetais desprovidas de parede celular) da planta a ser transformada e estes são submetidos a uma corrente elétrica. Esta…

gene de interesse na bactéria para que esta aja como um vetor inserindo o mesmo na planta. Por fim o tumor é retirado e cultivado com técnicas especiais até se tornar uma planta adulta possuindo o gene e sua expressão. Por fim a o método de eletroporação que é constituído pela técnica de introdução do DNA externo a células exposta a campos elétricos. A eletricidade acaba polarizando as regiões hidrofílicas dos fosfolipídios causando a repulsão entre os mesmo formando assim poros na…

transferências de genes específicos de um indivíduo para outro com maior rapidez e segurança. Essas técnicas englobam mecanismos de transferência indireta com o uso de Agrobacterium tumefaciens e Agrobacterium rhizogenes e os de via direta como a eletroporação, a biolística (“shot gun”) e a microinjeção. O método de transformação pode ser usado para introduzir genes pertencentes a qualquer potencial pool gênico de qualquer classe de organismo e mesmo genes sintéticos. Devido a grande…

polietilenoglicol, eletroporação, lipossomos, micro e macroinjeção. O método de aceleração de partículas consiste em "dar um tiro" de DNA nas células-alvo de transformação. Para isso, foram desenvolvidos aparelhos de alta pressão a gás que "empurram" micropartículas de ouro ou tungstênio cobertas com o DNA de interesse para as células-alvo. Essas partículas penetram nas células e liberam o DNA, que é integrado ao genoma da célula. Os métodos de transformação por polietilenoglicol e…

instável, ou seja você introduz na célula mas ele ainda pode ser degradado Métodos para transfecção: Mecânicos e elétricos Mecânicos: microinjeção no embrião, porém tem que fazer uma célula de cada vez, sendo trabalhosa e sem precisão Biolística Eletroporação Sistema via vetores virais : introdução do transgene na célula. É feito através de vírus atenuados que são utilizados para “empacotar” o gene dentro do vírus que vão ser introduzidos na pessoa. Os vírus são um meio de…

tratar o câncer. Em meados da década de 80 o dr. Lluis Mir teve a idéia de utilizar um fenômeno, até então utilizado em experimentos de transfecção gênica, para facilitar a entrada de fármacos para o interior da célula. Este fenômeno se chama eletroporação ou eletropermeabilização.  onde a doença se encontra em estágio inicial e restritas a uma localização bem precisa (geralmente isso acontece em formações menores). É claro que no caso onde o tumor é irressecável ou o animal…